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天然细胞外囊泡 (EV) 是携带大量生物活性分子的脂质囊泡,包括可溶性和膜蛋白、核酸和代谢物。它们最近被认为是一种有前途的无细胞替代细胞移植或作为各种疾病的新型治疗工具。许多在体外和体内研究表明,来自不同细胞类型的 EV 对心血管疾病、免疫紊乱和皮肤再生等疾病具有有益作用。此外,正在研究将 EV 作为靶向药物输送的潜在工具。它们由大多数细胞类型分泌,通常从细胞培养基中分离出来。然而,由于这些制剂的高度异质性和批次间差异以及它们有限的可扩展性,它们的临床应用受到限制。自然 EV 隔离的程序通常是成本和时间密集型的,并且需要专门的设备,例如差速超速离心或切向流过滤。此外,电动汽车的组成无法精确操纵,它们的作用机制在很大程度上仍然难以捉摸,
RCPRC的科学家开发了一种自下而上的方法,允许分两步组装合成电动汽车。首先,根据所需的脂质组成,通过脱水和再水化,由市售合成脂质形成小单层囊泡(直径约 100 nm)。通过调整脂质成分,可以设计具有不同电荷和机械特性的囊泡,并且可以包含荧光脂质。然后可以使用表面活性剂稳定的油包水乳液将这些小囊泡融合成直径约 500 nm 至几微米的较大囊泡。在此步骤中,亲水性分子,如可溶性药物、染料或核酸,可以被封装到囊泡的水腔中。在囊泡从周围的油相中释放出来后,它们的表面被重组蛋白或其细胞外结构域修饰。可使用不同的蛋白质结合策略,包括 His 标签结合 NTA(Ni2+ )-功能化脂质以及生物素-链霉亲和素或基于 NHS 化学的结合。原则上,也可以考虑将跨膜蛋白重组到囊泡中。这种方法使我们能够精确控制合成 EV 的脂质和蛋白质组成以及封装的化合物。
因此,从化学构建块组装合成 EV 的自下而上的方法可以提供更快、更精确定义、可重复和可扩展的方法来为不同的生物医学应用设计许多不同类型的合成 EV。
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